腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中使用最廣泛的傳遞機制。近年來，基于AAV病毒開發(fā)的基因療法的研發(fā)及臨床試驗注冊項目數(shù)量呈指數(shù)級增長，截至目前，美國FDA已批準五項AAV療法，同時，用于基因治療的AAV也是全球市場上最為昂貴的藥物之一，其中售價最高的Hemgenix®，每劑價格約為350萬美元。由于該療法每劑量可能需要1011-1016載量的AAV病毒，如何實現(xiàn)高效的AAV生產(chǎn)，已成為工藝流程優(yōu)化中的重要一環(huán)。

西美杰代理的Mirus成立于1996年，在核酸遞送領域深耕多年，TransIT-VirusGEN® GMP 轉(zhuǎn)染試劑支持AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商業(yè)級別生產(chǎn)。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉(zhuǎn)染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus將專利的多聚物及脂質(zhì)技術進行多重組合，針對不同細胞類型，不同應用場景，有著不同轉(zhuǎn)染方案。

Mirus專利遞轉(zhuǎn)平臺Polymers + Lipids的多重、多功能組合

     在病毒生產(chǎn)工藝方面，除了需要克服細胞遞轉(zhuǎn)過程中的多重阻礙，以實現(xiàn)更高效轉(zhuǎn)染和更低細胞毒性；增強子的加入，還可大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量。但Mirus并沒有止步于此，為了進一步提高下游生產(chǎn)中的AAV產(chǎn)量， 今年七月底西美杰代理的Mirus發(fā)布用于AAV生產(chǎn)的RevIT? AAV Enhancer，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉(zhuǎn)染試劑或其他品牌轉(zhuǎn)染試劑 (如PEI等)。基于HEK293懸浮細胞數(shù)據(jù)，相對于老版本AAV增強子，RevIT? AAV Enhancer可將AAV基因組滴度提高1.2-4.9倍，并且使用更便捷，非常容易整合入現(xiàn)有的AAV生產(chǎn)工藝流程中。Mirus RevIT? AAV Enhancer的推出，使得AAV上游生產(chǎn)成本進一步降低成為可能，進而降低基因治療藥物單劑量成本。

RevIT? AAV Enhancer

RevIT? AAV Enhancer：可以將AAV基因組滴度提升1.2-4.9倍

實驗結果顯示，平行對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強子(VirusGen + Enh 1.0)和新版本RevIT? AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，針對AAV2、AAV8、AAV9不同血清型，基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外，在測試的所有血清型中，使用RevIT? AAV Enhancer也在不同程度上收獲了更高比例的實心率 (圖1)。該結果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑時，新版本增強劑RevIT? AAV Enhancer可顯著提高AAV基因組滴度(GC/mL)及實心率(%Full Capsids)。

圖1 . 相比Mirus老版本增強子，加入RevIT? AAV Enhancer后，可將AAV基因組拷貝數(shù)提升1.2-4.9倍，同時改善AAV病毒實心率。

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛適配性，搭配其他品牌轉(zhuǎn)染試劑（如PEI），AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測試兩個品牌轉(zhuǎn)染試劑：Polyplus FectoVIR®轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro®轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer P”)，在加入Mirus RevIT? AAV Enhancer，針對不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2)。實驗結果表明，在搭配其他品牌病毒轉(zhuǎn)染試劑時，Mirus RevIT? AAV Enhancer也可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL)。

圖2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒轉(zhuǎn)染試劑搭配Mirus RevIT? AAV Enhancer，針對不同血清型AAV，其病毒基因組滴度都有著顯著提升。

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛的適配性，可適用于不同培養(yǎng)基體系

Mirus TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑搭配RevIT? AAV Enhancer，在不同品牌的病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基中，具有很好的兼容性。測試使用293-VP 2.0細胞，搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實驗結果表明，針對不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT? AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實驗條件下，AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異（圖3）。

圖3. 更換不同品牌病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基，AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異。

RevIT? AAV Enhancer實驗流程更靈活，在轉(zhuǎn)染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

為了進一步確認加入RevIT? AAV Enhancer來提高AAV產(chǎn)量是否需要嚴格把控加入時間，平行測試了不同加入的時間點，包括轉(zhuǎn)染前30min或60min、轉(zhuǎn)染時及轉(zhuǎn)染后。實驗結果顯示，相比于對照組，在不同時間點加入RevIT? AAV Enhancer， AAV8病毒基因組滴度均有穩(wěn)步的提升(2倍)，并且病毒實心率也穩(wěn)定保持在相同水平（圖4）。該實驗結果表明，RevIT? AAV Enhancer加入時間點的靈活性，一定程度上簡化了生產(chǎn)工作流。

圖4.  RevIT? AAV Enhancer在轉(zhuǎn)染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

實驗tips：如何進行病毒轉(zhuǎn)染試劑評估？什么是病毒載量？如何檢測？

  更多詳細信息，請查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ，更加詳細地介紹了檢測和計算病毒滴度的詳細方法。

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Mirus產(chǎn)品年鑒

   西美杰代理的美國Mirus公司成立于1995年，是世界上很早開發(fā)高效、低毒轉(zhuǎn)染試劑的公司，同時也是該類試劑的主要供應商之一。其產(chǎn)品線涵蓋化學轉(zhuǎn)染試劑、電轉(zhuǎn)染產(chǎn)品、病毒生產(chǎn)和轉(zhuǎn)導產(chǎn)品，適用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)和動物模型構建等領域。Mirus被公認為轉(zhuǎn)染試劑開發(fā)的領跑者，其許多杰出成果獲得世界公認與廣大用戶的好評。

   北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理，始終秉承著專業(yè)、嚴謹?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務，Mirus熱銷轉(zhuǎn)染產(chǎn)品常備現(xiàn)貨。如果您對上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站m.rlj.org.cn了解更多產(chǎn)品信息。